本细胞周期检测试剂盒是利用细胞内 DNA 能够和荧光染料结合的特性,细胞各个时期其DNA 含量不同从而结合的荧光染料不
同,流式细胞仪检测的荧光强度也不一样来检测细胞周期。
细胞周期(cell cycle)是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,通常由G0/G1 期、S 期、G2 期和M 期组
成。G1 期:细胞开始RNA 和蛋白质的合成,但DNA含量仍保持二倍体。S 期:DNA 开始合成,这时细胞核内DNA 的含量介于
G1 期和G2 期之间。当DNA 复制结束成为4 倍体时,细胞进入 G2 期。G2 期的细胞继续合成 RNA 及蛋白质,直到进入M 期。因
此,单纯从DNA 含量无法区分G2 期和M 期。一旦有丝分裂发生,细胞分裂成两个细胞,这两个细胞或者进入下一个细胞周期,
或者进入静止期(G0 期),而 G0 期从 DNA 含量上同样无法与 G1 期区分。因此,整个复制周期可以描述为G0/
G1、S、G2/M 期。通过核酸染料PI 标记DNA,并由流式细胞仪进行分析,可以得到细胞各个时期的分布状态,计算出 G0/
G1%、S%、G2/M%,了解增殖能力,在肿瘤病理学研究中,通常以S 期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标
7AAD 为插入性核酸荧光染料,能选择性的嵌入核酸 DNA 双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合的量与 DNA 的含量成正比
例关系,用流式细胞仪进行分析,就可以得到细胞周期各个阶段的 DNA 分布状态,从而计算出各个期的百分含量。7-AAD 染
色后,假设 G0/G1期细胞的荧光强度为 1,那么含有双份基因组 DNA 的G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行 DNA
复制的 S 期细胞的荧光强度为 1-2 之间。
一般细胞周期检测试剂盒采用 PI 染色,但是由于 PI 的发射波长是<625nm,通常在 FL2 中检测,对FITC、PE 的干扰大。PI 由
于波谱较宽,同时在 FL2\FL3 中也能测,所以用了 PI 最多再加一个 FITC,FL3 就没法用了。PI 还有一个重要的缺点是不容易清
洗干净,使用后清洗流式细胞仪更加费时费物。
7-AAD 细胞周期试剂盒有效的解决了这些弊端,7-AAD 的发射波长是650nm,只占用 FL3 通道进行检测,FITC、PE 两个通
道受影响都小,可以做三色分析。